储存条件

-70℃，六个月有效 

操作步骤（所有步骤须戴实验手套操作）

1、培养皿提前预热平衡至室温或37℃。 

2、将适量体积的质粒DNA或连接产物置于1.5 ml试管中进行冰预冷。 

3、从低温冰箱中取出ECC，用手指快速反复擦拭试管外壁，直至约1/3 ECC融化。 

4、用吸头轻轻搅拌均匀，快速移取10-100 μl ECC加入已预冷的质粒DNA、连接或重组产物中。 

5、立即进行中低速（涡旋仪速度建议调至50%）涡旋点振荡3次，每次不超过1 sec。 

6、质粒转化液可直接铺板培养，而连接或重组产物转化时，冰上静置5 min。 

7、取全部转化菌液铺到提前预热好的培养皿上，放置37℃培养箱过夜。 

注意事项

A、ECC细胞在半融化状态下转化效率更高，为避免使用时完全融化，请勿用水浴快速融化、勿用手紧捂着融化，而是用手指反复擦拭试管外壁使其融化，并随时观察融化状态。一般1 min左右底部可见少量融化液体，融化约1/3时，立即用移液枪吸头轻轻搅拌至可以吸取的状态，按DNA/ECC体积比<10%吸出需要量并立即加入到质粒DNA中（亦可以把预冷质粒、连接或重组产物直接加入半融化ECC中），依照建议方法混匀。批量转化时，ECC细胞可冰浴融化，但融化后应尽快使用以免转化效率下降。 

B、ECC和质粒DNA混匀时，将涡旋仪转速调至中档可充分混匀且不损伤细胞，快速点振荡3次，每次时间不要超过1 sec（避免用移液枪吹打、搅匀、或用手指弹匀，以免混匀不充分），立即铺板培养，或冰浴5-30 min，之后不需要热激活即可铺板培养。 

C、在铺板培养之前，ECC和质粒DNA混匀后适当延长冰浴时间（可至2 hr），以及培养板在室温或37℃预热30 min，都可以进一步提高转化效率。若采用经典转化方法，ECC可获得更高的转化效率（>109）。